熒光顯微鏡：該方法的原理

的光進一步無機和有機流體吸收和再發射是磷光或熒光的結果。 現象之間的差是光束的吸收和發射之間的時間間隔的持續時間。 當這些過程的熒光幾乎同時發生，而磷光 - 一些延遲。

歷史信息

1852年，英國科學家斯托克斯，首先描述熒光。 他引入了新的術語與所述實驗的結果 螢石， 其在紫外線照射下發出紅色光。 斯托克斯注意到一個有趣的現象。 據發現，所述熒光輻射的波長總是比激發光的流動越大。

為了證實在19世紀的假設出現了很多實驗。 他們指出，各種樣品的紫外線的作用下發熒光。 在這些材料中，除其他外，一直晶體，樹脂，礦物，葉綠素，生藥，無機化合物，維生素，油。 直接用生物試驗染料僅於1930年開始

熒光顯微鏡：描述

一些在20世紀研究的前半部分所用的材料都呈現出高的特異性。 стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. 由於採用了性能，這無法通過對比的方法來實現， 熒光顯微鏡的方法已成為生物醫學和生物研究的重要工具。 同樣獲得了重要成果，並為材料。

? 哪些優點熒光顯微鏡的方法是什麼？ 採用新材料已成為可能，並具有高度特異性細胞亞顯微組分的選擇。 熒光顯微鏡可以檢測單個分子。 各種染料，允許多個項目的鑑定一次。 儘管設備，這又取決於樣品的特定性質的衍射極限的空間分辨率的限制，低於該水平的分子的鑑定也完全可能的。 照射表現出自身熒光後的不同的樣品。 這種現象被廣泛應用於岩石學，植物學，半導體行業。

特點

研究動物組織或病原體通常比較複雜或過弱或非常強的非特異性自身熒光。 然而，在研究中的值獲取引入在特定波長激發的材料組分和發射必要的光流的強度。 熒光染料作為附接至結構（可見或不可見），其能夠獨立地染料。 因此它們具有高選擇性的目標，和量子產率。

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. 熒光顯微鏡自天然和合成染料的出現得到了廣泛應用。 他們擁有發射和激發一定的強度分佈和針對特定生物靶標。

單個分子的鑑定

通常情況下，在理想狀態下，你可以註冊一個獨立的元素光暈。 為此，除其他事項外，有必要提供在檢測器和光學背景的足夠低的噪聲。 熒光分子衰竭漂白可以發出高達300萬。光子。 在此過程中20％的收集效率，並可以將它們在約60千元量寄存器。

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. 基於雪崩光電二極管或電子倍增熒光顯微鏡 ，使研究人員能夠通過第二觀察單個分子的行為，在某些情況下甚至幾分鐘。

複雜性

支持光學背景噪聲的抑制的一個關鍵問題。 由於許多在過濾器和鏡頭表現出一定的自發熒光設計中使用的材料，在早期階段的科學家的努力為導向，以生產具有低熒光成分的事實。 然而，隨後的實驗帶來了新的結論。 , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. 特別是，人們發現， 熒光顯微鏡，基於全內反射，它允許實現低背景和高強度的激發光。

機制

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. 熒光顯微鏡的，基於全內反射的原理是利用漸逝波或倏逝的。 它發生在不同媒體之間的邊界 折射率。 在這種情況下，光束通過棱鏡。 它具有高折射率參數。

鄰近於所述水溶液或玻璃具有低參數棱鏡。 如果在它針對的是更關鍵的角度的光的光束，該光束被完全從界面反射。 這種現象，進而導致非傳播波。 換句話說，所產生的電磁場穿入具有較低折射率的參數的距離小於200納米的介質。

倏逝波的光的強度將足以激發熒光團。 然而，由於其非常小的深度，它的體積會很小。 其結果是一個低層次的背景。

修改

熒光顯微鏡是基於全內反射，可以用落射照明來實施。 這需要具有高數值孔徑透鏡（至少1.4，但最好是它達到1.45-1.6），並且部分地照明場裝置。 後者是具有小的光斑尺寸來實現的。 對於更大的均勻性使用薄的環，這是由流的一部分阻塞。 為臨界角，在此之後有一個全反射，我們需要在透鏡浸入介質和顯微鏡蓋玻璃的折射的高水平。